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ELISA試劑盒檢測中用到的樣品處理方法
瀏覽次數:6265發(fā)布日期:2013-08-21
  hbzhan內容導讀:試劑盒使用時(shí)一定要根據自己的實(shí)驗需要購買(mǎi)提取試劑盒,如果不是試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì )影響RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析、分子克隆等后續實(shí)驗的結果。
  
  1.細胞培養物上清:
  
  細胞培養物于室溫1000g,離心10分鐘后收集上清,并將標本保存于-20℃,且應避免反復凍融。
  
  2.血清:
  
  標本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后與1000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
  
  3.血漿:
  
  可用EDTA或肝素作為抗凝劑標本采集后30分鐘內于2-8℃,1000g離心15分鐘,或將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
  
  4.尿液:
  
  無(wú)菌收集取初尿,離心除去沉淀物,既可用于檢測,要長(cháng)期保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護液放入-20℃冰箱長(cháng)期保存。
  
  5.組織勻漿:
  
  將組織標本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過(guò)夜,再經(jīng)過(guò)二次反復凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。
  
  當前提取效果好的是QIANGEN公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒,但其售價(jià)較高,單次實(shí)驗費用話(huà)費太大,對精度要求不高的實(shí)驗沒(méi)有必要購買(mǎi),當然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(cháng)的問(wèn)題(如果碰上國內無(wú)貨的時(shí)候,要從國外發(fā)貨,會(huì )等很長(cháng)一段時(shí)間)。普通的提取實(shí)驗用國產(chǎn)的試劑盒就足以,價(jià)格不高,基本上各地均有現貨,如天根(目前國內生產(chǎn)的試劑盒中銷(xiāo)售面比較廣的一種)等,其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯,性?xún)r(jià)比還可以。
  
  當然,就RNA的提取而言,不一定試劑盒的提取效果就非常好,其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法,效果也很不錯,如:TRIZOL、EDTA等,只是試劑盒使用方便,經(jīng)典的方法操作復雜一些。
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